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本试剂盒是百奥莱博公司基于比色法原理开发的，用于检测血清、组织、发酵液、细胞、培养液等样本中的乳酸的含量。

乳酸(Lactic acid，LD)又称2-羟基丙酸是一种化合物，是一种含有羟基的羧酸，分子式是C3H6O3，是糖无氧氧化（糖酵解）的代谢产物，产生于骨骼、肌肉、脑和红细胞，经肝脏代谢后由肾分泌排泄，参与生物化学很多反应过程。

以NAD为氢受体，LDH催化乳酸脱氢生成丙酮酸，使NAD转化为NADH。其中PMS递氢使NBT还原为紫色呈色物，呈色物的吸光度在530nm时与乳酸含量成线性关系。

• 仪器：530nm的酶标仪、37℃恒温水浴锅、涡旋混匀器、移液器、冰盒
  
• 试剂：生理盐水、纯水、蛋白定量试剂盒
  
• 耗材：试管、吸头、一次性手套

• 有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期，试剂拆封后请尽快使用完；
  
• 血清、血浆、组织等样本应新鲜，或者于-80℃以下保存半年以内检测；
  
• 严重溶血及黄疸会使检测结果偏高；
  
• 在批量实验前需进行预实验，以确定测定绝对OD（测定OD-空白OD）在0.05～0.35之间。如果测定绝对OD小于0.05，则需要加大样本浓度重新测定；如果测定绝对OD大于0.35，则需要将样本稀释后重新测定。

• 酶工作液：按酶稀释液∶酶储备液＝100∶1的比例混合，用多少配多少，配好后充分混合后待用，现用现配，24小时内有效。
  
• 显色工作液：使用前将粉末D，1支倒入1瓶试剂C中，待粉末全部溶解后，充分混匀溶解，即为显色工作液。2～8℃避光保存2周内有效。
  
  • 待粉末全部溶解后，用微量移液器取少许液体放入离心管中，反复颠倒离心管，再用微量移液器将离心管中的液体转移到瓶中，如此反复2～3次，使二者充分混匀，配成显色工作液。

• 血清、血浆、细胞培养液等样本：取血清（浆）、培养液用生理盐水稀释成不同浓度，做预实验，选择测定绝对OD（测定OD-空白OD）在0.05～0.35之间的浓度为最佳取样浓度。
  
• 组织样本：准确称取细胞沉淀湿重/组织重量，按重量(g)∶体积(mL)＝1∶9的比例加入9倍体积的生理盐水混合，冰水浴条件下机械匀浆，充分匀浆后，在2500×g，离心10min，取上清进行测定。取匀浆上清液用生理盐水稀释成不同浓度，做预实验，选择测定绝对OD（测定OD-空白OD）在0.05～0.35之间的浓度为最佳取样浓度。
  
• 细胞样本：取100μL细胞沉淀，约10⁷个细胞，常用PBS作为匀浆介质破碎后离心取上清测定。

• 按下表在96孔板中加入试剂：
  

  成分(μL)	空白管	标准管	测定管
  双蒸水	2
  3mmoL/L标准工作液		2
  样本			2
  酶工作液	100
  显色工作液	20
  混匀，37℃准确孵育10min。
  终止液	200

  
  
  • 试剂加样要准确，混匀要充分。
    
  • 也可以将以上试剂用量加大10倍，在离心管中进行反应，反应完成后将反应吸入酶标板进行检测。
• 混匀，蒸馏水调零，530nm，测吸光度值。

• 血清样本：
  

  血清中乳酸含量 (mmol/L)	＝	测定OD值－空白OD值	×	标准品浓度 (3mmol/L)	×样品测试前稀释倍数
  		标准OD值－空白OD值

  
  
• 细胞/组织样本：
  

  组织中乳酸含量 (mmol/gprot)	＝	测定OD值－空白OD值	×	标准品浓度 (3mmol/L)	÷	待测样品蛋白浓度 (gprot/L)
  		标准OD值－空白OD值